鸡硫酸褪黑色素(ms)elisa试剂盒-ag捕鱼平台

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鸡硫酸褪黑色素(ms)elisa试剂盒
鸡硫酸褪黑色素(ms)elisa试剂盒
品名:
鸡硫酸褪黑色素(ms)elisa试剂盒
货号:
f8645-a
产品品牌:
晶美,tsz
价格:
  
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鸡硫酸褪黑色素(ms)酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:                                                          96t

30pg/ml-1200pg/ml

 

使用目的:

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中硫酸褪黑色素(ms)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡硫酸褪黑色素(ms)水平。用纯化的鸡硫酸褪黑色素(ms)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入硫酸褪黑色素(ms),再与hrp标记的硫酸褪黑色素(ms)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物tmb显色。tmbhrp酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的硫酸褪黑色素(ms)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(od值),通过标准曲线计算样品中鸡硫酸褪黑色素(ms)浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(2400pg/ml

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂a

6ml×1

11

封板膜

2 

6

显色剂b

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含nan3的样品,因nan3抑制辣根过氧化物酶的(hrp)活性。

操作步骤

1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

1200pg/ml

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

600pg/ml

4号标准品

150μl5号标准品加入150μl标准品稀释液

300pg/ml

3号标准品

150μl4号标准品加入150μl标准品稀释液

150pg/ml

2号标准品

150μl3号标准品加入150μl标准品稀释液

75pg/ml

1号标准品

150μl2号标准品加入150μl标准品稀释液

 

 

2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.         温育:操作同3

8.         洗涤:操作同5

9.         显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.

10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

操作程序总结:

 

计算

  以标准物的浓度为横坐标,od值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的od值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与od值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的od值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.  请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本od值大于标准品孔第一孔的od值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8

2.有效期:6个月